АКЦИЯ! 2 упаковки по цене одной! ВАЖНО! Криомелт МН показан для профилактики и лечения вирусных заболеваний. Особенно Криомелт МН эффективен при первых признаках заражения, что крайне актуально, учитывая сложившуюся эпидемиологическую ситуацию с коронавирусом. Позаботьтесь о себе и близких!

Исследование влияние различных концентраций КРИОМЕЛТА на жизнеспособность, некроз и апоптоз клеток периферической крови человека

Криомелт позиционируется на рынке как мембраностабилизирующий препарат, обладающий гепатопротекторными свойствами. Имеются также данные о наличии противовирусной активности этого препарата, которые указывают на возможность иммуномодулирующего действия препарата.
Цель настоящего исследования – оценить влияние различных доз Криомелта на мембрано-зависимые параметры (жизнеспособность, апоптоз, некроз)  иммунокомпетентных клеток периферической крови человека.
Материалы и методы. При выборе диапазона  концентраций препарата исходили из того, что количество  криомелта в ампуле- 5 мг/мл предназначено для инъекции человеку весом  70 кг массы. Была определена  концентрация препарата  1.0×10-7  г как соответствующая 1 г/1 мл тела
Мононуклеарные клетки человека выделяли из периферической крови стандартным методом центрифугирования в градиенте фиколла-урографина (р=1,077 г/см3]. Клетки были получены от 16 доноров (9 мужчин и 7 женщин) в возрасте от 21 до 39 лет.
Выделенные мононуклеарные клетки периферической крови вносили в лунки 96-луночного круглодонного  планшета в количестве 1·105 на лунку и культивировали  в объеме 200 мкл на лунку в среде RPMI 1640, содержащей 10% аутологичной плазмы, 0,3 мг/мл L-глутамина, 2мМ/мл HEPES, при 37º C влажной атмосфере с 5% СО2  в течение 24 ч. присутствии указанных концентраций криомелта или без него в контроле. После культивирования количество живых, апоптотических и некротизированных клеток определяли с использованием реактивов Guava ViaCount Reagent (Cat. No. 4000-0040) и программы «Guava ViaCount» (Guava Technologies (USA), «Millipore»), методом проточной лазерной цитометрии (рисунок 1).  Статистическую значимость различий оценивали с помощью парного критерия Стьюдента.
Стандартный протокол GuavaViacount Рисунок 1. Стандартный протокол «GuavaViacount»(Guava Technologies (USA),«Millipore»).
Данные, характеризующие  абсолютные  и относительные количества живых клеток в культурах представлены на рисунках 2 и 3.

 

Живые клетки абсолютные значения
Рисунок 2.
Живые клетки в %
Рисунок 3.
Как следует из представленных данных,  криомелт не оказывал статистически достоверного влияния на абсолютное количество живых клеток в 24-часовой  культуре. Вместе с тем, криомелт в дозе 10-7     г/мл достоверно повышал процент живых клеток   в такой  культуре (P= 0,012)  Увеличение процентного содержания живых клеток  в присутствии других концентраций криомелта носило статистически недостоверный характер.

Данные, характеризующие  абсолютные и  относительные количества клеток, подвергшихся апоптозу,  представлены на рисунках 4 и 5.
Апоптотические клетки абсолютные значения
Рисунок 4.
Апоптотические клетки в%
Рисунок 5.
Согласно представленным данным, криомелт не оказывал существенного влияния на абсолютные количества апоптотических клеток. Некоторое увеличение процентного содержания таких клеток было обнаружено  при концентрации препарата 0,5 х 10-7  г/мл (P= 0,05)

Данные, характеризующие  абсолютные и  относительные количества  клеток, подвергшихся некрозу,  представлены на рисунках 6 и 7

Некротические клетки абсолютные значения.
Рисунок 6.
Некротические клетки в %
Рисунок 7.
Согласно полученным данным, криомелт способен снижать как абсолютное, так и относительное количество некротических клеток в культуре. При концентрациях 0,5 х 10-7 г/мл и 1,0 х 10-7 г/мл (P=0,02)(рис.5) и при концентрациях 0,5 х 10-7  г/мл (P= 0,02), 1,0 х 10-7  г/мл (P= 0,03) и для концентрации 4,0 х 10-7  г/мл (P= 0,002)  (рис.6).
Выводы:
Криомелт способен улучшать  клеточную жизнеспособность в культуре мононуклеарных клеток крови человека, возможно за счет мембраностабилизирующего эффекта и сдерживания процессов, приводящих к клеточному некрозу.  Иммуномодулирующие свойства криомелта могут быть в дальнейшем изучены в выбранном диапазоне концентраций.

Резюме. Было исследовано влияние различных доз криомелта (диапазон 0,5-4,0 x 10-7 г/мл ) на мембрано-зависимые процессы (жизнеспособность, апоптоз, некроз) клеток периферической крови человека, культивируемых in vitro в течение 24 ч. Согласно полученным данным криомелт может  улучшать клеточную жизнеспособность, возможно,  за счет мембраностабилизирующего эффекта и сдерживания процессов, приводящих к клеточному некрозу. Иммуномодулирующие свойства криомелта могут быть в дальнейшем изучены в выбранном диапазоне концентраций.